光(guang)(guang)(guang)(guang)曲線（光(guang)(guang)(guang)(guang)響應曲線）由一系列(lie)(lie)不同(tong)強度(du)的照光(guang)(guang)(guang)(guang)步(bu)驟組成，通常光(guang)(guang)(guang)(guang)強是(shi)逐(zhu)漸(jian)遞(di)(di)增的。在每個照光(guang)(guang)(guang)(guang)步(bu)驟結(jie)束時，執行飽和脈沖分析。滯后(hou)(hou)光(guang)(guang)(guang)(guang)曲線(Hysteresis light curves，HLC)與傳統光(guang)(guang)(guang)(guang)曲線的區別在于它除了(le)遞(di)(di)增的光(guang)(guang)(guang)(guang)強梯(ti)度(du)系列(lie)(lie)外增加(jia)了(le)遞(di)(di)減的光(guang)(guang)(guang)(guang)強梯(ti)度(du)序列(lie)(lie)。通過對滯后(hou)(hou)光(guang)(guang)(guang)(guang)曲線光(guang)(guang)(guang)(guang)強遞(di)(di)增和遞(di)(di)減相的比較，可以量化由照射高(gao)光(guang)(guang)(guang)(guang)引起的滯后(hou)(hou)效(xiao)應，其大(da)小和方向可以說明高(gao)光(guang)(guang)(guang)(guang)誘導的光(guang)(guang)(guang)(guang)合作用過程的激活以及(ji)隨(sui)后(hou)(hou)的恢(hui)復。對于絕大部分PAM而言(yan)，滯后(hou)光(guang)曲線的(de)(de)測(ce)量(liang)(liang)非常(chang)簡單，在Light Curve窗(chuang)口點擊Edit編輯一個先遞(di)增后(hou)遞(di)減的(de)(de)照光(guang)序列，然后(hou)點擊Start即可開始測(ce)量(liang)(liang)。下面我們以雙通道葉綠素熒光儀DUAL-PAM-100單通道測量Fluo為例，用圖文結合的方式將滯后光曲線的實驗流程分享給大家。實(shi)驗(yan)時間：200s-10min，如果(guo)需要能(neng)適應，時間更長。實(shi)驗材料(liao)：植物(wu)葉(xie)片(pian)，藻類懸浮液
將葉(xie)片夾(jia)到激(ji)發和(he)檢測單(dan)元(yuan)中間，上表面朝向檢測單(dan)元(yuan)。如果是測量(liang)藻類(lei)懸浮(fu)液(ye)，取(qu)1.4ml樣(yang)品(pin)，放(fang)到石(shi)英杯(bei)(bei)，然(ran)后將石(shi)英杯(bei)(bei)放(fang)到懸浮(fu)樣(yang)品(pin)架中間的(de)樣(yang)品(pin)槽(cao)中，蓋上蓋子。打(da)開Dual PAM的(de)軟件，電腦會自動識別開放(fang)的(de)端口，然(ran)后進入下面的(de)初始界面。Measure Mode測(ce)量模式選擇(ze)：FluoAnalysis Mode分析模式選(xuan)擇(ze)：SP AnalysisDetector Type檢測器類型根據所用設(she)備的具體配置選擇：DB或DRFluo Gain增(zeng)益選擇(ze)(ze)：5(High)；Damping阻(zu)尼選擇(ze)(ze)：1ms(High)打開左下角的F ML，觀(guan)察(cha)軟件界面右邊紅色的Fluo數值是否在0.2以(yi)上(shang)，0.6以(yi)下，如(ru)果不在該(gai)范圍，切(qie)換(huan)到Meas.Light設置界面調整Fluo Meas.Light的Int.，使Fluo的數值在0.2-0.6范圍內。
切換到(dao)Slow kin.設置界(jie)面，調整采(cai)點(dian)數和采(cai)點(dian)率，設置一個時(shi)間(jian)(jian)，該時(shi)間(jian)(jian)要長于滯后光曲(qu)線所需(xu)的(de)(de)總(zong)時(shi)間(jian)(jian)。以完整的(de)(de)滯后光曲(qu)線20步為例，如果單個光梯(ti)度的(de)(de)時(shi)間(jian)(jian)是30秒，所需(xu)的(de)(de)時(shi)間(jian)(jian)是10分鐘（600秒），因此上圖中Acquisition的(de)(de)Time：1280s是足(zu)夠的(de)(de)。切換到Sat.Pulse設置界(jie)面，檢查飽(bao)和脈沖(chong)的強度(du)和持(chi)(chi)續時間(jian)。默(mo)認設置Int.=6的強度(du)高達(da)10000 μmolm-2s-1，Width=300ms的持(chi)(chi)續時間(jian)足以飽(bao)和樣品，可滿足絕大部分實驗(yan)要(yao)求。
切換到Light Curve測量窗(chuang)口，點擊軟件右邊的(de)Edit，在彈(dan)出的(de)對(dui)話框(kuang)中編輯(ji)滯后(hou)(hou)光(guang)(guang)曲線(xian)的(de)照光(guang)(guang)程(cheng)序(xu)。第(di)一列(lie)(lie)(lie)為(wei)(wei)Step（不可(ke)(ke)修改(gai)(gai)(gai)），完(wan)整(zheng)的(de)光(guang)(guang)曲線(xian)最多(duo)可(ke)(ke)以運行20步。第(di)二列(lie)(lie)(lie)為(wei)(wei)PAR（無需(xu)修改(gai)(gai)(gai)），光(guang)(guang)合(he)有(you)效輻射(she)強(qiang)度(du)（μmolm-2s-1）；第(di)三列(lie)(lie)(lie)Intens.（Intensity，修改(gai)(gai)(gai)后(hou)(hou)第(di)二列(lie)(lie)(lie)會隨(sui)之變化）為(wei)(wei)光(guang)(guang)化光(guang)(guang)的(de)檔位，對(dui)應于強(qiang)度(du)檔位的(de)PAR自動(dong)(dong)從當前(qian)設(she)置的(de)PAR列(lie)(lie)(lie)表(biao)中獲取。滯后(hou)(hou)光(guang)(guang)曲線(xian)的(de)照光(guang)(guang)協(xie)議要求(qiu)光(guang)(guang)強(qiang)先升高(gao)，后(hou)(hou)降低，因此我(wo)們需(xu)要先設(she)置一個遞增(zeng)(zeng)的(de)變光(guang)(guang)梯(ti)度(du)，然(ran)后(hou)(hou)再(zai)把梯(ti)度(du)降下(xia)來，以完(wan)整(zheng)的(de)20個Steps為(wei)(wei)例，10個遞增(zeng)(zeng)，10遞減，對(dui)稱設(she)置。此時(shi)可(ke)(ke)以跳檔設(she)置（1，4，6，8，11，13，15，16，17，18，18，17，16，15，13，11，8，6，4，1）；第(di)四列(lie)(lie)(lie)Time/10s（可(ke)(ke)以修改(gai)(gai)(gai)），是每一個梯(ti)度(du)下(xia)光(guang)(guang)強(qiang)照射(she)的(de)時(shi)間，單(dan)位是10s，設(she)置3，即每個光(guang)(guang)強(qiang)梯(ti)度(du)照30s。一般選擇相同的(de)時(shi)間，Time設(she)為(wei)(wei)0，0被視為(wei)(wei)停止符。光(guang)(guang)曲線(xian)會在這一步自動(dong)(dong)停止。設(she)置完(wan)后(hou)(hou)即可(ke)(ke)點擊OK退出Edit對(dui)話框(kuang)。
在Light Curve窗口點擊Start，啟動(dong)滯后光曲線的(de)測量(liang)，軟(ruan)件會(hui)自動(dong)執(zhi)行先前編輯好(hao)的(de)照光協議(yi)。測量(liang)完成后，可以在Repot查(cha)看，保(bao)存或導出滯后光曲線的數據。滯(zhi)后光曲線(xian)的(de)(de)數據分析(xi)可以參考光合作用(yong)專業期刊Photosynthesis Research上發(fa)表的(de)(de)題為“Hysteresis light curves: a protocol for characterizing the time dependence of the light response of photosynthesis”的(de)(de)研究文章。(Ser?dio, J., et al. (2022). "." Photosynthesis Research 154(1): 57-74. )上述實驗流程為(wei)最基(ji)本的操(cao)作步驟，如果您有更多細節(jie)問題需(xu)要咨詢可以聯系(xi)熟悉的技術工程師(shi)。更多PAM的使用(yong)技巧及參考文獻(xian)可以聯系(xi)我(wo)們，我(wo)們將竭(jie)誠為(wei)您提供滿意的服務。
