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葉綠素?zé)晒庵Πl(fā)現(xiàn)蒽醌衍生物賦予植物光脅迫耐受性
日期:2025-02-28 16:45:52

2025年2月27日,Communications Biology在線(xiàn)發(fā)表日本東京大學(xué)農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)研究生院Wataru Yamori課題組標(biāo)題為Identification and characterization of compounds that improve plant photosynthesis and growth under light stress conditions的研究論文。文章通過(guò)葉綠素?zé)晒獬上裣到y(tǒng)構(gòu)建了基于煙草葉圓片的高通量化學(xué)篩選系統(tǒng),發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證了蒽醌衍生物(如A1N和A4N)能夠通過(guò)增強(qiáng)光系統(tǒng)I(PSI)的電子接受能力緩解植物高光脅迫,顯著提升光合效率和作物生長(zhǎng),且對(duì)非脅迫條件下的植物無(wú)負(fù)面影響,為農(nóng)業(yè)抗逆化學(xué)品的開(kāi)發(fā)提供了新策略。

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研究背景
全球人口預(yù)計(jì)到2050年將達(dá)100億,但當(dāng)前約10%的人口面臨糧食短缺。氣候變化引發(fā)的極端天氣(如高溫、強(qiáng)光)導(dǎo)致約91%的農(nóng)田遭受環(huán)境脅迫,造成作物減產(chǎn)。其中,光合作用能力的下降是作物減產(chǎn)的主要原因。植物在強(qiáng)光條件下,光系統(tǒng)II(PSII)和光系統(tǒng)I(PSI)的電子傳遞鏈易發(fā)生過(guò)載,導(dǎo)致活性氧(ROS)積累和光合機(jī)構(gòu)損傷。PSI的過(guò)度還原(如P700的快速電荷重組)會(huì)進(jìn)一步加劇光抑制,降低光合效率和作物產(chǎn)量。

現(xiàn)有抗逆策略或多或少的都存在局限性。例如基因改造,通過(guò)引入玉米GOLDEN2-LIKE基因或苔蘚的Flavodiiron蛋白可增強(qiáng)光脅迫抗性,但公眾對(duì)轉(zhuǎn)基因作物的安全性擔(dān)憂(yōu)限制了其應(yīng)用?;瘜W(xué)生物學(xué)方法也可以提高作物抗性,已有研究通過(guò)小分子化合物調(diào)控植物氣孔開(kāi)閉或代謝通路(如乙酸誘導(dǎo)抗旱性),但針對(duì)光脅迫的化學(xué)保護(hù)劑研究幾乎空白。亟需開(kāi)發(fā)一種非轉(zhuǎn)基因的化學(xué)保護(hù)劑,通過(guò)改善光合電子傳遞效率緩解高光脅迫,同時(shí)不影響正常生長(zhǎng)條件下的植物表現(xiàn)。

技術(shù)路線(xiàn)
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首先是高通量化學(xué)篩選系統(tǒng)的構(gòu)建,以煙草(Nicotiana tabacum)葉圓片為研究對(duì)象,該樣品具有均勻的光合活性,適合大規(guī)模篩選。設(shè)計(jì)兩輪篩選流程:第一輪使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板對(duì)12,000種化合物進(jìn)行初步篩選,以葉圓片光合參數(shù)(Fv/Fm、Y(II))為指標(biāo);第二輪對(duì)初篩陽(yáng)性化合物進(jìn)行3次以上重復(fù)驗(yàn)證,排除含毒性基團(tuán)(如-NO?、-C≡N)的化合物。最終,篩選出33種候選化合物,最終選定兩種安全且高效的蒽醌衍生物A1N和A4N,并進(jìn)一步研究其10種結(jié)構(gòu)類(lèi)似物(A14N、A48N、A1N4C、A1N、A1458N、A1Ch、A14Ch、A14Ch23C、A1Ch2C、A4Ch1C)。
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第二步是基于光合參數(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。在篩選系統(tǒng)的基礎(chǔ)上進(jìn)行葉圓片實(shí)驗(yàn),通過(guò)700 μmolm?2·s?1強(qiáng)光處理12小時(shí)誘導(dǎo)光脅迫,A1N和A4N處理組的光合誘導(dǎo)速率(Y(II))顯著高于對(duì)照組(圖2)。然后進(jìn)行濃度依賴(lài)性評(píng)估,低濃度(0.08–2 μg·mL?1)下,蒽醌衍生物顯著提升光合效率;高濃度(4 μg·mL?1)可能抑制PSII功能。

除了葉圓片實(shí)驗(yàn),本研究也進(jìn)行了蒽醌衍生物對(duì)完整葉片的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,使用四種植物(煙草、生菜、番茄和擬南芥)進(jìn)行,A1N處理組在72小時(shí)光脅迫后,PSII和PSI的電子傳遞速率(ETR II/ETR I)及CO?同化率顯著高于對(duì)照組(圖5)。PSI氧化能力測(cè)量實(shí)驗(yàn)證實(shí)A1N和A4N可作為PSI的電子受體,通過(guò)氧化PSI受體側(cè)(如A0/A1)減少過(guò)度還原。

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第三步是蒽醌衍生物光脅迫抗性化學(xué)保護(hù)劑的分子機(jī)制與基因表達(dá)分析。電子傳遞鏈定位,蒽醌衍生物在PSI的電子接受能力為MV(甲基紫精)的78-86%,但在PSII中無(wú)活性(圖4C)。其還原電位(A1N: -816 mV vs. SHE)低于PSI的P700(-1320 mV),但高于PSII的P680(-620 mV),表明其特異性作用于PSI。RNA測(cè)序相關(guān)的轉(zhuǎn)錄組分析顯示,A1N處理組擬南芥在光脅迫下光合相關(guān)基因(如光捕獲復(fù)合體、電子傳遞鏈基因)的表達(dá)下調(diào)較少,表明其通過(guò)保護(hù)光合機(jī)構(gòu)減少基因調(diào)控壓力。

最后,本研究對(duì)蒽醌衍生物作為光脅迫抗性化學(xué)保護(hù)劑的長(zhǎng)期效應(yīng)與安全性進(jìn)行了評(píng)估。通過(guò)恢復(fù)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),光脅迫處理96小時(shí)后,A1N處理組的擬南芥、生菜和番茄在恢復(fù)期(1周)表現(xiàn)出更高的葉綠素含量(SPAD值)和生物量,且未出現(xiàn)早期開(kāi)花等脅迫癥狀(圖6-8)。安全性方面,非脅迫條件下,A1N處理組的光合參數(shù)和生長(zhǎng)指標(biāo)與對(duì)照組無(wú)差異。表面施用的蒽醌衍生物在7天內(nèi)完全降解,無(wú)環(huán)境殘留風(fēng)險(xiǎn)。

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研究意義
首先,植物光脅迫抗性化學(xué)保護(hù)劑在農(nóng)業(yè)應(yīng)用中有巨大潛力,本研究提供了一種非轉(zhuǎn)基因的解決方案,通過(guò)葉面噴施蒽醌衍生物(如A1N)增強(qiáng)作物在極端光照條件下的抗逆性,適用于蔬菜、水果、花卉等高附加值作物。在光脅迫下提升光合效率達(dá)30-40%,顯著減少產(chǎn)量損失。

其次,本研究首次揭示蒽醌衍生物通過(guò)調(diào)節(jié)PSI氧化還原狀態(tài)緩解光脅迫的分子機(jī)制,填補(bǔ)了化學(xué)生物學(xué)在光脅迫領(lǐng)域的研究空白。建立的高通量葉圓片篩選系統(tǒng)和技術(shù)路線(xiàn)為未來(lái)植物抗逆化學(xué)品劑的開(kāi)發(fā)提供了高效平臺(tái)。

最后,也是最重要的一點(diǎn)是蒽醌衍生物的環(huán)境與安全性?xún)?yōu)勢(shì),它們天然存在于地衣、植物中,具有低毒性和快速降解特性,符合可持續(xù)農(nóng)業(yè)需求。避免了基因改造作物的監(jiān)管和公眾接受度問(wèn)題。

重點(diǎn)關(guān)注
本研究中,基于煙草葉圓片構(gòu)建的的高通量化學(xué)篩選系統(tǒng)是以葉綠素?zé)晒獬上裣到y(tǒng)MAXI-IMAGING-PAM為底盤(pán)的,5.35 mm的煙草葉圓片放置在96孔板進(jìn)行篩選。96孔板孔內(nèi)提前放置棉球并加200μL蒸餾水以營(yíng)造潮濕的環(huán)境。將葉圓片放在棉球上,葉子的頂部朝上。在整個(gè)過(guò)程中,它們保持濕潤(rùn)。番茄和生菜完整葉片以及擬南芥植株的光合參數(shù)測(cè)量,蒽醌衍生物長(zhǎng)期效應(yīng)與安全性評(píng)估也都是通過(guò)MAXI-IMAGING-PAM葉綠素?zé)晒獬上裣到y(tǒng)完成的。
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此外,實(shí)驗(yàn)樣品PSII和PSI期間電子傳輸速率的測(cè)定還用到了雙通道葉綠素?zé)晒鈨xDUAL-PAM-100和GFS-3000光合儀及聯(lián)用葉室。系統(tǒng)全面的評(píng)估了蒽醌衍生物對(duì)煙草、番茄、生菜和擬南芥幼苗的短期和長(zhǎng)期的影響。

DUAL-PAM-100 and GFS-3000.jpg
原文
Qu, Y., Sakoda, K., Wakabayashi, Y., et al. Identification and characterization of compounds that improve plant photosynthesis and growth under light stress conditions[J]Communications Biology, 2025, 8: 300.
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