流式細(xi)胞儀能否辨別到種(zhong)是一(yi)些藻類檢測工作(zuo)者最關心(xin)的問題之(zhi)一(yi)。而成像質量的提高，可幫(bang)助我(wo)們觀測到鑒定相關的細(xi)節和高清晰度的內(nei)部小結(jie)構。
理論(lun)上，放大(da)倍(bei)(bei)數(shu)越高，成像(xiang)質量越好，如40X或(huo)60X。 然而缺點(dian)是倍(bei)(bei)率(lv)越高景(jing)深越小，因此(ci)一些成像(xiang)倍(bei)(bei)率(lv)高的(de)(de)(de)設備(bei)通常采(cai)用(yong)非(fei)常窄的(de)(de)(de)流(liu)(liu)動(dong)(dong)池(chi)，也(ye)就意(yi)味著(zhu)你只能分析非(fei)常小的(de)(de)(de)顆(ke)(ke)粒(li)，因此(ci)，野外樣品（如自(zi)然海水等）需要將所有大(da)粒(li)徑的(de)(de)(de)顆(ke)(ke)粒(li)過濾掉。CytoBuoy經(jing)過不懈努力(li)，更新光學元件，實現在(zai)16X放大(da)倍(bei)(bei)數(shu)下使(shi)用(yong)非(fei)常大(da)的(de)(de)(de)流(liu)(liu)動(dong)(dong)池(chi)呈現高質量的(de)(de)(de)圖像(xiang)。新系統(tong)可(ke)設置僅(jin)在(zai)顆(ke)(ke)粒(li)穿(chuan)過相機焦平面時進行拍攝，這意(yi)味著(zhu)不再有模糊照(zhao)片(pian)形(xing)成的(de)(de)(de)照(zhao)片(pian)流(liu)(liu)阻礙。
關于CytoSense當前使用的(de)超大流通池和放大倍數，CytoBuoy 公(gong)司CEO George B.J. Dubelaar 先生給了比較詳細的(de)介紹：
樣品的過濾預處理
為(wei)防(fang)止流(liu)式細胞儀管(guan)路堵(du)塞，大(da)部分流(liu)式細胞儀都會標明客戶在分析(xi)樣(yang)(yang)品之前(qian)需要對(dui)樣(yang)(yang)品進(jin)行過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)預(yu)處(chu)理(li)。而我(wo)們使(shi)用(yong)的(de)(de)(de)濾(lv)(lv)(lv)膜過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)孔徑與實(shi)際通(tong)(tong)(tong)過(guo)(guo)(guo)的(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)粒(li)(li)徑并非完全一致。實(shi)際上，如(ru)果(guo)你使(shi)用(yong)過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)孔徑為(wei)Xμm 的(de)(de)(de)濾(lv)(lv)(lv)篩過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)樣(yang)(yang)品，一般(ban)來說(shuo)自(zi)由(you)通(tong)(tong)(tong)過(guo)(guo)(guo)的(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)粒(li)(li)徑只有(you)X的(de)(de)(de)1/3。粒(li)(li)徑大(da)于1/3Xμm 的(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)會隨著過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)時間的(de)(de)(de)增長越(yue)來越(yue)難自(zi)由(you)通(tong)(tong)(tong)過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)篩。因此，通(tong)(tong)(tong)過(guo)(guo)(guo)的(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)數量偏低(di)且對(dui)濃度的(de)(de)(de)評估不準確，因為(wei)接近Xμm大(da)小(xiao)的(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)幾(ji)乎(hu)沒(mei)有(you)通(tong)(tong)(tong)過(guo)(guo)(guo)。所(suo)以(yi)，使(shi)用(yong)非常(chang)粗略的(de)(de)(de)方法可(ke)以(yi)推(tui)測，在儀器入口前(qian)對(dui)任何(he)顆(ke)粒(li)(li)使(shi)用(yong)Xμm孔徑的(de)(de)(de)篩網(wang)進(jin)行過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)，所(suo)得最(zui)大(da)顆(ke)粒(li)(li)粒(li)(li)度的(de)(de)(de)正(zheng)確測定值僅為(wei)X的(de)(de)(de)一半。假如(ru)設備要求樣(yang)(yang)品分析(xi)前(qian)必須經過(guo)(guo)(guo)70μm 網(wang)篩過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)，這可(ke)能意味著其最(zui)佳分析(xi)粒(li)(li)徑為(wei)30-40μm。對(dui)于CytoSense, 我(wo)們建議采用(yong)1mm甚(shen)或1.2mm濾(lv)(lv)(lv)膜過(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)以(yi)防(fang)堵(du)塞。
圖像清晰度的關鍵還取決于光學透鏡的設計
我們(men)通常認為(wei)成(cheng)像(xiang)(xiang)質量依賴于(yu)透鏡(jing)的(de)放大(da)倍數。有些成(cheng)像(xiang)(xiang)流(liu)式細胞(bao)儀只有在(zai)40X和60X放大(da)倍率(lv)下(xia)才能(neng)獲得好(hao)的(de)照(zhao)片，這(zhe)種(zhong)倍率(lv)下(xia)景深(shen)極窄和畫框(kuang)尺(chi)寸(cun)非(fei)常小。對(dui)(dui)與野外(wai)樣品就會存在(zai)粒(li)(li)徑(jing)限制——最大(da)照(zhao)片畫框(kuang)尺(chi)寸(cun)的(de)20X倍率(lv)也只能(neng)分(fen)析120μm。CytoSense 具有16X 放大(da)倍數，然而(er)我們(men)最新透鏡(jing)（專門為(wei)我們(men)流(liu)式細胞(bao)儀定制設計）的(de)光(guang)學設計非(fei)常優秀，而(er)且(qie)事實上(shang)聚(ju)焦的(de)圖像(xiang)(xiang)的(de)清晰(xi)度比我們(men)的(de)其他同(tong)類(lei)產品的(de)20X放大(da)倍率(lv)還要(yao)好(hao)。更重要(yao)的(de)是(shi)，我們(men)可(ke)以對(dui)(dui)所有大(da)到直徑(jing)500um的(de)顆粒(li)(li)進行高質量成(cheng)像(xiang)(xiang)。
分享一組測試照片，感受一下新版CytoSense實際的成像效果。結合散點圖(tu)，Silico-imaging詳細(xi)(xi)記錄(lu)細(xi)(xi)胞(bao)的全部光學信息，逐(zhu)個掃(sao)描，不放過(guo)自然水體(ti)中的稀有藻種(zhong)。
| 空星藻（Coelastrum.） |  |
| 小環藻（Cyclotella sp.） |  |
| 小環藻（Cyclotella sp.） |  |
| 小環藻（Cyclotella sp.） |  |
| 直鏈藻（Melosira） |  |
| 顆粒直鏈藻極狹變種（Melosira granulata var angustissima） |  |
| 角甲藻（Ceratium） |  |
| 魚磷藻（Mallomonas） |  |
| 根管藻（Rhizosolenia） |  |
| 等片藻Diatoma |  |
| 嚙蝕隱藻Cryptomons erosa |  |
| 浮游動物 |  |