提速小麥單倍體技術產業化進程——原創小麥單倍體花青素標記鑒別系統
日期：2023-03-08 17:31:35
小(xiao)麥(mai)是世(shi)界上最重要(yao)(yao)的糧食作物之一，為人類提供約20%的食物熱量(liang)。隨著全球人口的增加，2050年小(xiao)麥(mai)產(chan)量(liang)需要(yao)(yao)提高70%，培育優良品種是提高產(chan)量(liang)的有效途徑。然而，使(shi)用傳統方(fang)法非常(chang)耗時，培育一個新(xin)的小(xiao)麥(mai)品種通常(chang)需要(yao)(yao)至少8-10年。但(dan)通過雙單倍體（Doubled Haploid，DH）育種技術的運用，純系只需1-2個世代即可產生，顯著縮短育種周期，大大加快了育種進程。DH系生產包括3個環節，即單倍體誘導 、單倍體加倍和DH系繁殖與鑒定，每個環節都對純系的生產效率至關重要。
在小麥單(dan)(dan)倍體(ti)誘導(dao)環節，前(qian)期中(zhong)(zhong)國農(nong)業大(da)學團(tuan)隊(dui)研(yan)究團(tuan)隊(dui)通過(guo)敲除(chu)玉米單(dan)(dan)倍體(ti)誘導(dao)關鍵基因ZmPLA1的(de)同(tong)源基因，率先在小麥中(zhong)(zhong)建立(li)了(le)單(dan)(dan)倍體(ti)誘導(dao)(haploid induction, HI) 技(ji)術(shu)(shu)體系，單倍(bei)體誘導效(xiao)率(lv)高于(yu)20%。小(xiao)麥單倍(bei)體技(ji)術(shu)(shu)體系雖有了高效(xiao)的誘導技(ji)術(shu)(shu)，但(dan)是該技(ji)術(shu)(shu)的應用仍(reng)需解決小(xiao)麥單倍(bei)體鑒別等問題，開(kai)發高效(xiao)的標記是實現小(xiao)麥單倍(bei)體鑒別(haploid identification, HID) 的核心。2023年3月1日， Plant Communications在線發表了中國農業大學陳紹江、劉晨旭團隊題為“Establishment of an efficient haploid identification system by engineering anthocyanin accumulation in wheat embryo”，該研究利用玉米花青素調控基因ZmC1和ZmR，成功創制了小麥紫胚芽鞘誘導系PCI和紫胚誘導系PEI，實現了小麥單倍體的精準鑒別，并利用PEI誘導系成功創制了DH系，展現了該技術在小麥育種中的應用前景。前人研(yan)究(jiu)(jiu)表明ZmC1和(he)ZmR可以調控植(zhi)物(wu)花青素(su)(su)合成，中國(guo)農業大學研(yan)究(jiu)(jiu)團(tuan)隊為了測試使用ZmC1和(he)ZmR進行小麥(mai)HID的(de)(de)(de)(de)(de)可行性，評估了轉基因品(pin)系AL-30和(he)AL-40的(de)(de)(de)(de)(de)色(se)(se)素(su)(su)沉(chen)著情況(kuang)，這些品(pin)系分別含有(you)pUbi驅動的(de)(de)(de)(de)(de)ZmC1和(he)pUbi驅動的(de)(de)(de)(de)(de)ZmR。AL-30和(he)AL-40在胚(pei)(pei)(pei)(pei)胎和(he)種皮分別出現色(se)(se)素(su)(su)沉(chen)著（圖1A）。除此(ci)以外(wai)，在胚(pei)(pei)(pei)(pei)胎或胚(pei)(pei)(pei)(pei)乳中沒有(you)發現AL-30、AL-40和(he)野(ye)生型之間(jian)的(de)(de)(de)(de)(de)差(cha)異。接下來，通過將(jiang)AL-30和(he)AL-40雜交，研(yan)究(jiu)(jiu)團(tuan)隊創造(zao)了一個同(tong)時具有(you)ZmC1和(he)ZmR的(de)(de)(de)(de)(de)F1。結(jie)果表明，成熟的(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)(pei)(pei)胎（ME），未(wei)成熟的(de)(de)(de)(de)(de)胚(pei)(pei)(pei)(pei)胎（IE）和(he)F1果核(he)的(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)胚(pei)(pei)(pei)(pei)層(ceng)都顯示出深紫色(se)(se)色(se)(se)素(su)(su)，表明ZmC1和(he)ZmR能協同(tong)促進花青素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)(de)積累(圖1A）。然而(er)，ZmC1和(he)ZmR的(de)(de)(de)(de)(de)同(tong)時過表達也導致(zhi)導致(zhi)葉片強烈的(de)(de)(de)(de)(de)色(se)(se)素(su)(su)沉(chen)著，嚴重阻礙了幼苗的(de)(de)(de)(de)(de)生長(chang)，最(zui)終導致(zhi)死(si)亡。因此(ci)，不能簡單(dan)地將(jiang)pUbi驅動的(de)(de)(de)(de)(de)ZmC1和(he)ZmR用于小麥(mai)的(de)(de)(de)(de)(de)HID。研究團(tuan)隊(dui)將組成型(xing)表達(da)ZmC1的(de)材(cai)料AL-30與誘(you)導系進行雜(za)交，通過分子(zi)標記與表型(xing)輔助選擇，育(yu)成了紫胚芽(ya)鞘誘(you)導系PCI。利(li)用(yong)該(gai)誘(you)導系雜(za)交的(de)后代，根(gen)據胚芽(ya)鞘顏色可實(shi)現單倍(bei)體精(jing)準(zhun)鑒別（圖1B-C），單倍(bei)體鑒別準(zhun)確率為(wei)96.3%（圖1G-H）。圖1 中國(guo)農業大學研(yan)究團(tuan)隊建立的高效(xiao)小麥HID系統為(wei)了(le)在種(zhong)子(zi)階(jie)段實現可視化的HID，研究團隊確定了(le)一(yi)個胚胎偏(pian)好的啟動子(zi)Oleosin-like基(ji)因—TaOle。TaOle的(de)(de)(de)(de)(de)1419bp啟(qi)動子片(pian)段與ZmR和(he)ZmC1的(de)(de)(de)(de)(de)CDS融合，構成(cheng)pTaOle驅動的(de)(de)(de)(de)(de)ZmR-P2A-ZmC1表達載體(ti)（圖(tu)(tu)1D）。將該(gai)載體(ti)被轉化到小麥(mai)單倍體(ti)誘導系TaPLA-4A和(he)TaPLA-4D中(zhong)，結果表明(ming)所有四個陽性轉基(ji)因(yin)植株在(zai)(zai)IE和(he)ME中(zhong)都顯示出深紫(zi)色(se)(se)的(de)(de)(de)(de)(de)色(se)(se)素(su)沉著，但(dan)在(zai)(zai)其他(ta)組(zu)織中(zhong)沒(mei)有染色(se)(se)，表明(ming)pTaOle在(zai)(zai)轉基(ji)因(yin)植物的(de)(de)(de)(de)(de)胚胎中(zhong)工作良(liang)好（圖(tu)(tu)1E）。更重要的(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)，這些轉基(ji)因(yin)植物的(de)(de)(de)(de)(de)生長(chang)和(he)發育沒(mei)有受到影響，這是(shi)對AL-30和(he)AL-40的(de)(de)(de)(de)(de)F1雜種的(de)(de)(de)(de)(de)巨大改良(liang)。在(zai)(zai)T1代(dai)中(zhong)，具有ZmR-P2A-Zm純(chun)合基(ji)因(yin)型的(de)(de)(de)(de)(de)個體(ti)被篩(shai)選并命名為(wei)紫(zi)色(se)(se)胚胎誘導系（PEI）。為了測試HID的性能，我們用CS、JW1和MR-H的胚(pei)胎供體植物與花粉來(lai)自同源的T1 PEI植物的花粉雜交。根據IE和ME中(zhong)色素沉(chen)著的缺失情況，篩選出推測的單倍體（圖1F），并通過流式細胞儀和表型進一步驗證（圖1G）。在IE階段，有11個和9個推定的單倍體分別來自CS和JW1，后被驗證為真正的單倍體；在ME階段，有2個、6個和3個假定的單倍體分別來自CS、JW1和MR-H。倍性分析的結果顯示分析結果顯示，只有MR-H的一個推定單倍體被發現是二倍體（6N）。為了進一步評估HID的準確性，在T2代中篩選了13個假定的CS單倍體，所有這些都被證實是真正的單倍體。因此，在IE和ME階段的總體HID準確性為97.7%（圖1H）。同樣的方法用于驗證18個假定的二倍體(6N）的紫色胚胎，所有這些胚胎都被確認為真正的二倍體（6N）。上述結果表明，PEI可以實現小麥的高效HID。此外，研(yan)究(jiu)團(tuan)隊(dui)將F1雜交(jiao)種（CS×Fielder）與PEI雜交(jiao)，產(chan)生單(dan)(dan)倍(bei)體用于染色體加倍(bei)。總共獲得11個(ge)單(dan)(dan)倍(bei)體，所(suo)有的(de)(de)單(dan)(dan)倍(bei)體在(zai)秋水仙素處理后都加倍(bei)了。為了研(yan)究(jiu)DH是否在(zai)所(suo)有的(de)(de)染色體上都是純合(he)的(de)(de)，用靶向(xiang)測序技術(shu)對11個(ge)DH的(de)(de)基因組進行了基因分型。9158個(ge)單(dan)(dan)核苷酸多態(tai)性（SNPs）的(de)(de)生物信息學分析顯示，沒(mei)有一個(ge)DH攜帶雜合(he)的(de)(de)位點(dian)（圖1I），表明PEI可以誘導純合子，并可能成為小麥DH育種的一個前景廣闊的工具。該研究原創(chuang)的(de)小(xiao)麥(mai)單倍體花青素標記鑒別(bie)系統，為新型小(xiao)麥(mai)單倍體育種技術(shu)從(cong)理(li)論研究到實踐(jian)應用(yong)邁(mai)出了一大步，提速小(xiao)麥(mai)單倍體技術(shu)產業化的(de)進程，對于加快小(xiao)麥(mai)育種進程具有里程碑(bei)式的(de)意義。綜上所述， DH育種(zhong)(zhong)因(yin)具(ju)備周期(qi)短(duan)(duan)、純度高等優點，獲得(de)了(le)國內外各大農(nong)業公(gong)司及育種(zhong)(zhong)單(dan)位(wei)的(de)密切關(guan)注。對(dui)于種(zhong)(zhong)業公(gong)司來說，早(zao)日推(tui)出優異(yi)新品(pin)種(zhong)(zhong)就可以早(zao)日獲取效益(yi)，而對(dui)于育種(zhong)(zhong)家們(men)來說，縮短(duan)(duan)育種(zhong)(zhong)周期(qi)、加快育種(zhong)(zhong)速度是(shi)他們(men)畢(bi)生的(de)奮斗目標。隨著單(dan)倍體誘(you)導關(guan)鍵調(diao)控(kong)基因(yin)的(de)進一(yi)步挖掘和基因(yin)編輯技術(shu)的(de)聯合使用(yong)， DH育種技術已經不僅僅局限在玉米純系的創制上，其應用也由玉米拓展到單子葉作物水稻、小麥、谷子，以及雙子葉擬南芥、蒺藜苜蓿、番茄、煙草等多種植物上，未來 DH育(yu)種技術在(zai)作(zuo)(zuo)物(wu)育(yu)種和改(gai)良上將發揮(hui)更大的作(zuo)(zuo)用，糧食作(zuo)(zuo)物(wu)以及(ji)蔬(shu)菜經濟作(zuo)(zuo)物(wu)工(gong)廠化應用將很快到來。Qi X, Guo S, Zhong Y, et al. . Plant Communications, 2023, 100568.
北大荒墾豐種業-澤泉科技(ji)生物技(ji)術(shu)與表型服務中心是由北(bei)大荒墾豐種業股(gu)份(fen)有限(xian)公司和(he)(he)上海澤泉(quan)科技股(gu)份(fen)有限(xian)公司共同(tong)建設(she)的開(kai)放式(shi)高通量植(zhi)物(wu)(wu)基(ji)(ji)(ji)因型(xing)-表(biao)型(xing)-育種服(fu)務(wu)(wu)平(ping)臺(tai)。中心(xin)建立了基(ji)(ji)(ji)因克隆和(he)(he)載(zai)體(ti)平(ping)臺(tai)、作物(wu)(wu)轉(zhuan)化(hua)系統、基(ji)(ji)(ji)因型(xing)分(fen)(fen)析平(ping)臺(tai)、表(biao)型(xing)鑒定(ding)分(fen)(fen)析平(ping)臺(tai)、數據分(fen)(fen)析和(he)(he)利用平(ping)臺(tai)等現代化(hua)生物(wu)(wu)技術和(he)(he)信息支持平(ping)臺(tai)，是定(ding)位(wei)于為植(zhi)物(wu)(wu)科研和(he)(he)作物(wu)(wu)育種提供植(zhi)物(wu)(wu)基(ji)(ji)(ji)因型(xing)-表(biao)型(xing)-育種數據分(fen)(fen)析的科研服(fu)務(wu)(wu)平(ping)臺(tai)。為(wei)了縮短您的育(yu)種(zhong)進(jin)程，提(ti)高您的育(yu)種(zhong)成功率，北大荒墾豐種(zhong)業澤泉(quan)科技生物技術與表型(xing)服(fu)務(wu)中(zhong)心將為(wei)您提(ti)供(gong)一(yi)體化DH生產服(fu)務(wu)。我們提(ti)供DH服(fu)務(wu)技(ji)術流程：從實驗(yan)室——溫室——田間一體化服(fu)務(wu)。父本誘導(dao)系誘導(dao)母(mu)本材料(liao)，孤雌生(sheng)殖，產生(sheng)單倍體(ti)種子（幼胚）。20-60份/皿。置于人工培養室(shi)（帶光照(zhao)層架(jia)）或人工培養箱中培養48小時左右。將幼胚在體視熒(ying)光(guang)顯(xian)微鏡下觀察(cha)或(huo)者在日光(guang)燈下觀察(cha)，以自交系所得幼胚為對照。因為雜合二倍體含(han)有(you)(you)父本基因，所以單倍體有(you)(you)微弱熒(ying)光(guang)或(huo)無色。將挑選(xuan)的(de)擬單倍體直接置于含(han)有加倍藥劑（秋水仙素）的(de)MS培(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)上，暗(an)(an)培(pei)養(yang)(yang)；后轉(zhuan)入(ru)不含(han)加倍藥劑的(de)MS培(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)，暗(an)(an)培(pei)養(yang)(yang)后光照培(pei)養(yang)(yang)，待(dai)幼苗2葉一心時移至培(pei)養(yang)(yang)瓶中（MS培(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)）。將培養瓶中DH系幼苗在4葉一心時移栽至苗缽(bo)，在溫室中煉苗。待幼苗(miao)5-6葉期移栽至溫室花盆或大田(tian)，待散粉時，及時套袋(dai)進(jin)行自(zi)交(jiao)授粉。田間(jian)收(shou)獲(huo)和(he)鑒(jian)別(bie)。如果用采用花藥離體培養單倍體的(de)方(fang)法，則省去(qu)觀察幼胚(pei)的(de)步驟，其(qi)余步驟基本相同。花粉活(huo)力檢(jian)測分析服(fu)務花(hua)(hua)粉(fen)作(zuo)(zuo)為一(yi)種(zhong)重要的(de)(de)(de)種(zhong)質(zhi)資源，被廣泛利用(yong)到(dao)科學研究、新品繁育、農(nong)業研究、種(zhong)子生產(chan)等領(ling)域中(zhong)。通常(chang)，花(hua)(hua)粉(fen)容易(yi)受到(dao)光照、溫度(du)、濕度(du)等環境因素的(de)(de)(de)影響(xiang)，因此花(hua)(hua)粉(fen)活(huo)力(li)檢測(ce)(ce)(ce)是(shi)育種(zhong)和農(nong)業生產(chan)過(guo)(guo)程中(zhong)必不可少(shao)(shao)的(de)(de)(de)檢測(ce)(ce)(ce)指標(biao)。篩選高活(huo)性(xing)的(de)(de)(de)花(hua)(hua)粉(fen)進行(xing)授粉(fen)可以提高作(zuo)(zuo)物(wu)結籽率、果品品質(zhi)，提高產(chan)量(liang)(liang)預(yu)測(ce)(ce)(ce)的(de)(de)(de)準確性(xing)，進而減少(shao)(shao)農(nong)業生產(chan)過(guo)(guo)程中(zhong)不必要的(de)(de)(de)損失。傳統(tong)上進行(xing)花(hua)(hua)粉(fen)活(huo)力(li)檢測(ce)(ce)(ce)主要通過(guo)(guo)染色(se)法和體(ti)外萌(meng)發法，然而這兩種(zhong)方法費時耗力(li)、通量(liang)(liang)低、適用(yong)性(xing)及統(tong)計性(xing)差(cha)，往往不能滿(man)足育種(zhong)、生產(chan)過(guo)(guo)程中(zhong)的(de)(de)(de)日常(chang)需求(qiu)。花(hua)(hua)粉(fen)活(huo)力(li)分析儀通過(guo)(guo)檢測(ce)(ce)(ce)流經交流電場(chang)的(de)(de)(de)花(hua)(hua)粉(fen)顆粒的(de)(de)(de)電阻抗特性(xing)，實時獲取(qu)大量(liang)(liang)花(hua)(hua)粉(fen)顆粒的(de)(de)(de)大小、活(huo)性(xing)、濃度(du)等數據(ju)。該方法已(yi)應(ying)用(yong)于上百種(zhong)植物(wu)花(hua)(hua)粉(fen)活(huo)性(xing)的(de)(de)(de)檢測(ce)(ce)(ce)，是(shi)一(yi)種(zhong)高效、可靠且標(biao)準化的(de)(de)(de)檢測(ce)(ce)(ce)技(ji)術。澤泉科技AgriPheno平臺已引進Ampha? Z40花粉活力(li)分析(xi)儀并向廣大育種家和農(nong)業生(sheng)產者推出花粉活力(li)的(de)檢測分析(xi)服務。DH育(yu)種(zhong)是(shi)利用(yong)誘(you)導(dao)系誘(you)導(dao)（或(huo)花藥離(li)體(ti)(ti)(ti)(ti)培(pei)養(yang)等(deng)手段(duan)誘(you)導(dao)）產生(sheng)單(dan)(dan)倍(bei)體(ti)(ti)(ti)(ti)植株，再(zai)通過(guo)染色體(ti)(ti)(ti)(ti)組加(jia)倍(bei)（自然加(jia)倍(bei)或(huo)藥劑處理）使植物(wu)恢復(fu)正常(chang)染色體(ti)(ti)(ti)(ti)數(shu)的(de)育(yu)種(zhong)方法。由于自然單(dan)(dan)性生(sheng)殖或(huo)孤雄生(sheng)殖單(dan)(dan)倍(bei)體(ti)(ti)(ti)(ti)非(fei)常(chang)罕見(jian)，因此單(dan)(dan)倍(bei)體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)獲(huo)得(de)成為單(dan)(dan)倍(bei)體(ti)(ti)(ti)(ti)育(yu)種(zhong)的(de)一個難點，游離(li)小(xiao)孢(bao)(bao)子培(pei)養(yang)是(shi)獲(huo)得(de)單(dan)(dan)倍(bei)體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)重要手段(duan)之一。花粉活(huo)力分析儀（阻(zu)抗流式細胞技術，IFC）可以在(zai)DH育(yu)種(zhong)過(guo)程中(zhong)，幫(bang)助選擇小(xiao)孢(bao)(bao)子植物(wu)供體(ti)(ti)(ti)(ti)，評估(gu)小(xiao)孢(bao)(bao)子胚誘(you)導(dao)策略，優(you)化培(pei)養(yang)條件，并在(zai)小(xiao)孢(bao)(bao)子培(pei)養(yang)早期進行(xing)產胚量的(de)準確預測，可顯著提高游離(li)小(xiao)孢(bao)(bao)子培(pei)養(yang)的(de)成功率，進而加(jia)快DH育(yu)種(zhong)的(de)效率。花粉(fen)(fen)的(de)形成受到遺傳因(yin)素的(de)嚴格控制，而當控制花粉(fen)(fen)發育(yu)的(de)基(ji)因(yin)發生突變時將導致花粉(fen)(fen)質(zhi)量(liang)降(jiang)低(di)、花粉(fen)(fen)數量(liang)減少或是(shi)完全沒(mei)有花粉(fen)(fen)。雜(za)交(jiao)育(yu)種過程中，花粉(fen)(fen)敗育(yu)的(de)雄性(xing)不育(yu)系(xi)(xi)是(shi)理想(xiang)的(de)母本(ben)，而任(ren)意環境下具(ju)備大量(liang)高活(huo)性(xing)花粉(fen)(fen)的(de)雄性(xing)可育(yu)系(xi)(xi)則(ze)是(shi)理想(xiang)的(de)父本(ben)。不(bu)同(tong)品(pin)種的(de)蘋(pin)果花(hua)粉的(de)活性(xing)（含熱(re)滅活對照）花(hua)(hua)(hua)粉(fen)(fen)活性通(tong)常(chang)會受到光(guang)、熱(re)溫度、農藥等環境因(yin)素的(de)影響，可(ke)以通(tong)過(guo)不(bu)同條件(jian)下(xia)(xia)花(hua)(hua)(hua)粉(fen)(fen)的(de)活性來確定花(hua)(hua)(hua)粉(fen)(fen)生(sheng)長的(de)理想條件(jian)，或篩選優質、高(gao)抗品(pin)系。下(xia)(xia)圖為五(wu)種(zhong)不(bu)同植(zhi)物花(hua)(hua)(hua)粉(fen)(fen)對溫度變化的(de)響應(ying)，如(ru)圖所示，某(mou)些花(hua)(hua)(hua)粉(fen)(fen)是可(ke)以暴露(lu)在50℃的(de)高(gao)溫下(xia)(xia)的(de)（粉(fen)(fen)色(se)），而其(qi)他花(hua)(hua)(hua)粉(fen)(fen)則在45℃就(jiu)逐(zhu)漸失(shi)活。這(zhe)表明每(mei)一種(zhong)花(hua)(hua)(hua)粉(fen)(fen)都(dou)有其(qi)理想的(de)生(sheng)長溫度，獲得高(gao)活性花(hua)(hua)(hua)粉(fen)(fen)不(bu)能(neng)超過(guo)其(qi)理想生(sheng)長溫度。五種不同植(zhi)物花粉對溫度變化的響(xiang)應確定花粉采集時(shi)間、優化花粉儲存條(tiao)件(jian)育種和(he)生產過程(cheng)中，通(tong)常會遇到花(hua)期不育的問題，這(zhe)就需要(yao)提前采集(ji)花(hua)粉(fen)，保存(cun)備用。但自然條件下，絕大多(duo)數植物花(hua)粉(fen)的壽命都較短(duan)，而且容易(yi)受溫度、光照等(deng)因素的影響(xiang)，因此，何(he)(he)時收獲花(hua)粉(fen)，收獲后如(ru)何(he)(he)保存(cun)并維持花(hua)粉(fen)的活力(li)則(ze)至關重(zhong)要(yao)。未開(kai)放(fang)的花苞（左）和剛(gang)剛(gang)開(kai)放(fang)的花朵（中），花粉具備(bei)活性(xing)，當花蕊(rui)完全(quan)伸展后（右），花粉則不再具備(bei)活性(xing)。不(bu)同(tong)儲存(cun)條件下花粉(fen)活性的變化真菌孢子細胞與花粉粒具有高(gao)(gao)度相似(si)性，因此(ci)也可以(yi)進行類(lei)似(si)的(de)(de)活性檢測，目前已檢測過的(de)(de)細胞有細菌、酵(jiao)(jiao)母、藻(zao)類(lei)、動物、人體等單細胞。下圖為不同來源的(de)(de)酵(jiao)(jiao)母活性的(de)(de)對比，如圖所示，鮮(xian)酵(jiao)(jiao)母活性較(jiao)高(gao)(gao)；，而干燥(zao)酵(jiao)(jiao)母，即(ji)使(shi)于室溫下培育1小時，它(ta)的(de)(de)活性仍然比新鮮(xian)酵(jiao)(jiao)母低；取(qu)自啤酒的(de)(de)酵(jiao)(jiao)母細胞活性較(jiao)差。不(bu)同來(lai)源的酵母細(xi)胞(bao)活性對比如您(nin)需要了解更(geng)多信息，請點擊(ji)或掃描下方(fang)二維碼填寫登記表，我們會為您(nin)提供專業的服務，真(zhen)誠期待與您(nin)的合作！
