每種(zhong)(zhong)微生(sheng)物(wu)基本都有(you)各(ge)自的(de)特異性表(biao)面抗原(yuan)，使用單(dan)抗偶聯(lian)各(ge)種(zhong)(zhong)熒(ying)光素可方便檢測各(ge)種(zhong)(zhong)樣品(pin)中(zhong)的(de)微生(sheng)物(wu)。樣品(pin)經熒(ying)光染色(se)（如(ru)SYBR Green I 或(huo)其他染色(se)劑(ji)染色(se)）后(hou)，可用CytosSense 測定微生(sheng)物(wu)含量。(高通(tong)量：>200000cell ; 粒徑(jing)：0.1-700μm) ，目前可直接檢測大腸桿(gan)菌，嗜血桿(gan)菌、沙(sha)門(men)氏(shi)菌、結核(he)桿(gan)菌、銅綠假單(dan)胞菌、軍(jun)團桿(gan)菌等(deng)。在瑞士，FCM方法(fa)被列為標準(zhun)細菌監測方法(fa)。
2.1 激光檢測器配置：488nm激光器，綠/黃檢測熒光通道。
2.2 進樣系統設置：使用CytoSense 檢測細菌時我們建議在樣品泵中使用特殊的管道，以盡量減少染色細胞粘附在管道上，對其他操作沒有影響。即更換下圖配件：
A） 實驗室手動染色樣品
如果(guo)樣品(pin)制備(bei)中(zhong)進行了細胞(bao)清洗，則直接上(shang)機檢測(ce)沒(mei)有影響；如果(guo)樣品(pin)沒(mei)有清洗，樣品(pin)含有游(you)離染料，則有兩種選擇：
a）“正常(chang)使用循環(huan)鞘(qiao)液(ye)”：為防止染(ran)料(liao)在鞘(qiao)液(ye)中積聚，緩慢增(zeng)加(jia)熒光通道中的背景信號(hao)，因此(ci)建議(yi)定期投加(jia)氯(lv)。可以(yi)通過安裝加(jia)氯(lv)泵(beng)實現自動化，或者，我(wo)們可以(yi)安裝一個帶(dai)有流動開(kai)關的特殊過濾(lv)器(qi)（下(xia)圖），以(yi)從鞘(qiao)液(ye)中去除染(ran)料(liao)。
b） 使用(yong)(yong)“非循環鞘液(ye)(ye)(ye)系統”：可(ke)將“受污(wu)染”的鞘液(ye)(ye)(ye)會(hui)立即從儀器(qi)中(zhong)排出(chu)，無需再(zai)循環，本方案只需為鞘液(ye)(ye)(ye)提供足夠的清潔水(shui)。外(wai)置鞘液(ye)(ye)(ye)系統有(you)利于保護管路和內置的過濾系統，延長其使用(yong)(yong)壽命。濁度(du)較高(gao)的樣(yang)(yang)品(pin)，藻濃度(du)較高(gao)的樣(yang)(yang)品(pin)，也可(ke)以使用(yong)(yong)外(wai)置鞘液(ye)(ye)(ye)系統來運行(xing)儀器(qi)。
外置鞘液系統連接方式如下：（標準CytoSense即可，用(yong)戶(hu)可方便自行改(gai)裝）
非(fei)循環外置鞘液系統(tong)
增加配件 “細菌染色(se)模(mo)塊”，可以(yi)自動調節鞘液。同時 “染色(se)模(mo)塊”，可以(yi)實現自動染色(se)。適用于水中微生物我(wo)的在線自動監測(ce)。
使用方法：與正常細胞檢(jian)測一樣，沖洗(xi)、啟動和(he)分析(xi)操作是自動化的，所有(you)程(cheng)序都在軟件中編(bian)寫。熒光染料有(you)時需要在瓶子(zi)空(kong)了(le)之后重新(xin)填充(chong)，定期(qi)更換氯和(he)過濾器-取決于使用情況(kuang)等，可自動運行(xing)幾個月。
※ 對于已經擁有CytoSense的最終用戶，不需要購買另一臺CytoSense，只需加配染色模塊，對現有CytoSense做微小調整，以適應與染色模塊的耦合（如電子連接和安裝不同類型的樣品泵）。
3.1 上升流系統和人為活動對巴西沿海地區微生物多樣性的影響(巴西里約熱內盧聯邦大學)
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利采用CytoSense對沖(chong)(chong)擊式氣(qi)體采樣器收集到的氣(qi)載細(xi)菌和參(can)考(kao)菌株大(da)腸桿(gan)菌進行(xing)計數和鑒(jian)定。配置488nm激(ji)光(guang)器，550nm的高靈敏度黃(huang)光(guang)發射傳(chuan)感器。同(tong)時記錄每個粒(li)子(zi)的脈沖(chong)(chong)形狀(zhuang)的信號(hao)可用于(yu)估計細(xi)胞體積，并將細(xi)胞定義為(wei)不同(tong)細(xi)胞類型的特定簇。分(fen)析粒(li)子(zi)體積通過FWS的掃描脈沖(chong)(chong)圖或SWS的掃描脈沖(chong)(chong)圖估算。 |
自(zi)動染色模塊（SM）安裝于CytoSense，可(ke)同時原位自(zi)動采(cai)樣、分(fen)析浮游(you)(you)植(zhi)物(wu)和細菌。水(shui)樣在(zai)行船過(guo)程(cheng)中(zhong)持續(xu)泵入系統，SYBR Green I熒光(guang)染料通(tong)過(guo)小的染色容器逐(zhu)滴加入樣品(pin)（V/V=1：10000），經15min 染色反(fan)應后自(zi)動泵入CytoSense。通(tong)過(guo)本次項目(mu)地中(zhong)海海洋研究(jiu)所展示了CytoSense 不(bu)僅可(ke)以檢(jian)測自(zi)發熒光(guang)的浮游(you)(you)植(zhi)物(wu)，而且可(ke)檢(jian)測細菌、鞭毛蟲、纖毛蟲等微生物(wu)。經過(guo)2 小時一次共七天的實驗，獲得了更多有效數(shu)據。
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