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阻抗流式細胞儀的應用:區分存活和凋亡中國倉鼠卵巢(CHO)細胞
日期:2023-10-15 13:08:20
測量生物細胞隨頻率變化的電阻抗,即電阻抗譜(EIS),在區分不同類型或不同狀態的細胞方面顯示出巨大的潛力。這種非標記和非侵入性技術可與微流控技術相結合,實現快速的單細胞分析。EIS結合微流控技術的應用實例包括分析白細胞亞群、區分病變紅細胞與健康紅細胞以及干細胞分化研究。本研(yan)究利用Ampha Z32 阻(zu)抗流式細胞(bao)儀(Amphasys,瑞士)在 0.3 至 30 MHz 頻率范圍內(nei)測量了中(zhong)國倉鼠(shu)卵巢 CHO 細胞(bao)在營養缺乏條(tiao)件(jian)下逐漸凋亡時阻(zu)抗振幅和相位(wei)的變化。然后(hou)采用了CHO 細胞(bao)雙(shuang)殼模型和靈敏(min)度分析(xi),確定了最佳測量頻率和外部介質電導(dao)率,從而(er)成功(gong)區分存活和凋亡的 CHO 細胞(bao)。


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圖1B 阻(zu)抗(kang)流式細(xi)胞儀(Ampha Z32,Amphasys AG)信號(hao)的采集和轉(zhuan)導
A)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)在(zai)不同頻(pin)率的交流電場中的檢測結果,低頻(pin)下(xia)反映(ying)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的體(ti)積特性(xing),高(gao)頻(pin)下(xia)反映(ying)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)膜(mo)的介電特性(xing)即(ji)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)活性(xing);B) 微流控芯(xin)片;C)流經(jing)交流電場的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的阻(zu)抗信(xin)號(藍色(se)實部(bu)即(ji)電阻(zu)信(xin)號,綠色(se)虛部(bu)即(ji)容性(xing)電抗信(xin)號),細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)膜(mo)完整(zheng)性(xing)決定容性(xing)電抗的大小(xiao),故可通過(guo)虛部(bu)信(xin)號來(lai)(lai)區分活細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)和死細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao),最終(zhong)以(yi)阻(zu)抗相(xiang)位(wei)角-振幅散點圖反映(ying)出來(lai)(lai)

當單個細(xi)(xi)(xi)(xi)胞流(liu)(liu)經微(wei)流(liu)(liu)控芯片的(de)(de)兩(liang)組平行電極(ji)時(shi),阻抗流(liu)(liu)式細(xi)(xi)(xi)(xi)胞儀將測(ce)量(liang)微(wei)流(liu)(liu)體通道中(zhong)單細(xi)(xi)(xi)(xi)胞的(de)(de)多(duo)頻阻抗。電場(chang)中(zhong)活細(xi)(xi)(xi)(xi)胞的(de)(de)等效電路由電阻(細(xi)(xi)(xi)(xi)胞質(zhi))和電容(rong)(細(xi)(xi)(xi)(xi)胞膜(mo))組成,在(zai)笛卡(ka)爾坐標系中(zhong),阻抗Z(ω)可以描述為實(shi)部(bu)分Zr(ω)或電阻與虛部(bu)分Zi(ω)或容(rong)性電抗的(de)(de)矢量(liang)和。

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相位(wei)角(θ)描述電阻(zu)和電抗之間的關系:

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阻抗指數即振幅(fu)表示為:

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在β-色散頻率(lv)區域,假設細(xi)胞(bao)體積(ji)與電極(ji)測(ce)(ce)量(liang)體積(ji)相(xiang)比較(jiao)小(體積(ji)分數較(jiao)小),測(ce)(ce)量(liang)的差分阻抗(kang)(以一組電極(ji)為參考)與細(xi)胞(bao)的復介電常數image005.png有關,如下所示:
image006.png
image007.png:外部介質的(de)復(fu)介電常數(shu);ε :角頻率;φ:體(ti)積(ji)分(fen)數(shu);KCM:克勞(lao)修斯-莫索(suo)提系(xi)數(shu);K:電極常數(shu);ε ?_cell:單殼(ke)或雙殼(ke)模(mo)型(xing)介電常數(shu)(與細胞特(te)性相關)。

本次研究在(zai)較高頻率下測(ce)得的(de)阻(zu)抗顯示,在(zai)0時(shi)有一(yi)個存活(huo)細(xi)胞群(qun),而(er)在(zai)營養缺乏 48 小時(shi)后(hou),存活(huo)細(xi)胞和(he)凋亡細(xi)胞有兩(liang)個不同的(de)細(xi)胞群(qun)。這一(yi)結果與介電泳測(ce)量(liang)技術(shu)的(de)測(ce)量(liang)結果一(yi)致。而(er)與介電泳相比,EIS 的(de)優勢在(zai)于(yu)可同時(shi)進行(xing)多頻率測(ce)量(liang),從而(er)提供更(geng)廣(guang)泛的(de)細(xi)胞生理狀(zhuang)態信息。該方法可廣(guang)泛用于(yu)生物(wu)制藥行(xing)業(ye),對生物(wu)過程進行(xing)持續(xu)監測(ce)
 
— 原文閱讀 —
Salimi E, Bergin A, Thomson D, et al. [J]

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